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MSC無(wú)血清培養(yǎng)基與血清培養(yǎng)基有何區(qū)別?
  • 發(fā)布日期:2020-07-03      瀏覽次數(shù):1222
    • 在描述產(chǎn)品區(qū)別之前,先簡(jiǎn)單描述下第3代間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基。
      第3代間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基是怎么開發(fā)出來(lái)的?
      研發(fā)人員根據(jù)近幾十年來(lái),中國(guó)及國(guó)外的科研人員在間充質(zhì)干細(xì)胞研究方面取得的一些成果,比如什么樣的物質(zhì)可以很好的促進(jìn)干細(xì)胞生長(zhǎng),什么樣的物質(zhì)可以抑制間充質(zhì)干細(xì)胞的分化,什么樣的物質(zhì)有更好的貼壁效果等等。
      在此基礎(chǔ)之上,開發(fā)出一個(gè)初步的間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基配方。
      然后,構(gòu)建相應(yīng)數(shù)學(xué)模型,結(jié)合大量的實(shí)驗(yàn),確定各種組分組合的比例。
      后,通過(guò)應(yīng)用于不同來(lái)源的人體組織(臍帶或脂肪),提取及培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞,微調(diào)產(chǎn)品配方,使培養(yǎng)基能夠更為廣泛的適用于人體不同來(lái)源的組織中間充質(zhì)干細(xì)胞的提取及培養(yǎng)。
      一句話,是根據(jù)人們對(duì)干細(xì)胞的認(rèn)識(shí),專門開發(fā)出來(lái)的針對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)產(chǎn)品。 
      血清培養(yǎng)基是什么情況? 
      一般應(yīng)用 DMEM/F12,或 a-MEM,加上胎牛血清。 
      一句話,是天然形成的產(chǎn)品,無(wú)法根據(jù)干細(xì)胞的特點(diǎn)進(jìn)行對(duì)應(yīng)調(diào)整與優(yōu)化。

      第3代無(wú)血清 MSC 培養(yǎng)基與血清 MSC 培養(yǎng)基有什么不同? 
      從大的方面來(lái)講,大致有 9 個(gè)方面的不同。
      1.從使用安全性來(lái)講
      無(wú)血清 MSC 培養(yǎng)基更安全。
      該培養(yǎng)基沒(méi)有添加血清,也沒(méi)有添加任何動(dòng)物來(lái)源的組分,化學(xué)成分限定。因此,該培養(yǎng)基沒(méi)有任何動(dòng)物來(lái)源組分,在這種間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)入人體后,不會(huì)引起由于人體免疫排斥所經(jīng)常發(fā)生的過(guò)敏及發(fā)燒癥狀。 
      另外,由于沒(méi)有任何動(dòng)物來(lái)源的組分,自然也不會(huì)有任何與此相關(guān)的致病菌或病毒等,比如瘋牛病毒等。 
      2.從使用便利性來(lái)講 
      更便利,需要的操作步驟更少。 
      使用友康間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基培養(yǎng)MSC,可用干細(xì)胞溫和消化酶(同樣是化學(xué)成分限定,無(wú)動(dòng)物源組分)進(jìn)行消化,且在消化后不需要終止消化(傳統(tǒng)做法一般用血清培養(yǎng)基或血清終止消化),用 PBS 直接稀釋離心去除即可。
      更少的操作,意味著更少的工作量以及更低的污染概率。 
      3.從干細(xì)胞產(chǎn)量來(lái)講
      MSC 的產(chǎn)量(擴(kuò)增倍數(shù))高于血清。 
      在 MSC 培養(yǎng)基中培養(yǎng)所得的干細(xì)胞數(shù)量,不僅取決于培養(yǎng)基可以提供的營(yíng)養(yǎng)組分,而且受細(xì)胞是否分化的極大影響。 
      第3代MSC 無(wú)血清培養(yǎng)基充分利用近幾年的科研成果,特別是干細(xì)胞分化與衰老機(jī)制的研究,通過(guò)組分的調(diào)整能夠可以更好的抑制細(xì)胞的分化。
      從細(xì)胞數(shù)量來(lái)講,一般一根 20CM 的臍帶,可以得到原代細(xì)胞的數(shù)量為 1E7。前三代的擴(kuò)增倍數(shù)均在 10 倍以上。(接種密度 8000 cells/cm2)。 
      而血清培養(yǎng)基,由于其來(lái)源于動(dòng)物血液,所以既有抑制干細(xì)胞分化的組分,也有促進(jìn)干細(xì)胞分化的組分,沒(méi)有辦法人工選擇。 
      比如,血清中含有葡萄糖,再加上培養(yǎng)基里的糖,總含量就比較高了,高濃度糖易促衰老和分化;另外血清中一般均含有外泌體,是細(xì)胞分泌的一種囊泡結(jié)構(gòu),里面含有調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)和分化的物質(zhì),不同血清中這些物質(zhì)的比例不一樣,所以也易導(dǎo)致分化;血清中含有代謝廢物,這些物質(zhì)一般對(duì)細(xì)胞均有損害,易導(dǎo)致衰老和分化。
      另外,目前很多用戶一般使用帶酚紅的培養(yǎng)基,酚紅作為常見的激素成分,對(duì)干細(xì)胞的生長(zhǎng)有著明顯的誘導(dǎo)分化的作用。
      事實(shí)上,使用無(wú)血清 MSC 培養(yǎng)基的細(xì)胞產(chǎn)量高,是目前中國(guó)客戶大量該換為無(wú)血清培養(yǎng)基的主要原因。而非安全性。
      4.從細(xì)胞質(zhì)量來(lái)講(形態(tài)、活性、干性及表型)
      從鏡下看,無(wú)血清 MSC 培養(yǎng)的干細(xì)胞形態(tài)短小,呈標(biāo)準(zhǔn)立體梭形,細(xì)胞邊緣清晰,透亮。這是細(xì)胞更少衰老與分化的直觀表征。
      相比來(lái)說(shuō)血清培養(yǎng)基培養(yǎng)出來(lái)的 MSC 細(xì)胞,細(xì)胞形態(tài)扁平,體積更大,邊緣不清晰。
      血清培養(yǎng)基成分復(fù)雜,含有很多促進(jìn)分化的物質(zhì),細(xì)胞易發(fā)生自發(fā)分化,因而細(xì)胞失去干性。另外,在體外定向分化時(shí),易有培養(yǎng)基殘留,會(huì)干擾定向分化。
      但無(wú)血清培養(yǎng)基配方明確,各物質(zhì)的量一定,不含干擾組分,細(xì)胞不易發(fā)生自發(fā)分化,干性維持較好,即使有殘留,也不會(huì)干擾定向分化。
      MSC 無(wú)血清培養(yǎng)基的表型,更為符合 MSC 細(xì)胞的定義。
      5.從使用成本來(lái)講
      使用 MSC 無(wú)血清培養(yǎng)基,成本傾向于越來(lái)越低。
      無(wú)血清培養(yǎng)基,其每一種組分都是人工合成的。包括氨基酸、無(wú)機(jī)鹽、重組蛋白等。隨著技術(shù)進(jìn)步與產(chǎn)能擴(kuò)大,所有人工制造的組分的生產(chǎn)成本均會(huì)大幅下降。
      特別是隨著培養(yǎng)基研發(fā)企業(yè)不斷的改進(jìn)產(chǎn)品,比如通過(guò)配方優(yōu)化,不斷降低昂貴的重組蛋白的使用量,干細(xì)胞培養(yǎng)基也在逐步向著*化學(xué)成分限定培養(yǎng)基發(fā)展(CD 培養(yǎng)基),CD 培養(yǎng)基不含昂貴的重組蛋白,成本自然會(huì)大幅下降。
      從用戶角度講,特別是干細(xì)胞藥物企業(yè)而言,選擇血清培養(yǎng)基或無(wú)血清培養(yǎng)基就是核心生產(chǎn)工藝的選擇。一旦選擇,以后極難更改。所以他們更傾向于選擇以后成本會(huì)越來(lái)越低的無(wú)血清培養(yǎng)基。 
      6.從干細(xì)胞藥物申報(bào)角度來(lái)講
      由于無(wú)血清培養(yǎng)基有著明確的產(chǎn)品配方,因此,監(jiān)管機(jī)構(gòu)要求的關(guān)于細(xì)胞殘留培養(yǎng)基組分的安全性驗(yàn)證的工作非常容易完成。
      由于血清培養(yǎng)基,血清中已知組分有 150 多種,還有多種未知組分,細(xì)胞制品中的培養(yǎng)基殘留安全性驗(yàn)證工作,極難完成,如果不說(shuō)不可能的話。
      7.從控制干細(xì)胞分泌因子角度來(lái)說(shuō)
      無(wú)血清培養(yǎng)基由于全組分都是人工添加的,因此,可以很方便的通過(guò)調(diào)節(jié)一些組分,來(lái)調(diào)節(jié)干細(xì)胞分泌的蛋白的含量。比如干細(xì)胞分泌的 PEG2,MSC 無(wú)血清培養(yǎng)基可以極為方便的通過(guò)調(diào)整不同組分的對(duì)比,大幅提高 PEG2 的表達(dá)。當(dāng)然,其他涉及干細(xì)胞制成品的分泌的細(xì)胞因子的表達(dá)量均可通過(guò) MSC 無(wú)血清培養(yǎng)基配方的調(diào)整得已實(shí)現(xiàn)。
      8.從細(xì)胞衰老角度來(lái)說(shuō)
      無(wú)血清培養(yǎng)基當(dāng)然不會(huì)添加會(huì)加速細(xì)胞衰老的物質(zhì)。
      而血清培養(yǎng)基中的血清組分很復(fù)雜,有 150 多種已知組分組分,多種未知組分。這些組分中,有些對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)是有利的,有些對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)是無(wú)作用的,有些對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)反而是有害的。研究表明過(guò)氧化氫誘導(dǎo)后的MSCs 出現(xiàn)衰老特征,在體外培養(yǎng)時(shí),這些活性氧(ROS)通過(guò)氧化 DNA、蛋白質(zhì)等生物大分子對(duì)細(xì)胞造成傷害,加速細(xì)胞的衰老。干細(xì)胞對(duì)微環(huán)境中 ROS 的累積水平特別敏感,而血清中含有 ROS,可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi) ROS 大量聚集而引起細(xì)胞出現(xiàn)應(yīng)激誘導(dǎo)的早熟性衰老。 
      9.從性能穩(wěn)定性來(lái)說(shuō)
      無(wú)血清培養(yǎng)基有明確的配方,因此,批間差極小,近乎沒(méi)有。
      而血清來(lái)自不同個(gè)體的牛,由于牛的體質(zhì)不同,其血清中各種組分的差異很大。比如血清中的 EGF,有的含量為 10ug/ml,有的僅為 2ug/ml,相差了 5 倍。不同品牌間,甚至同品牌產(chǎn)品批次差別可能很大。培養(yǎng)效果沒(méi)有保證。

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