在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，經(jīng)常加入5%-20%的胎牛血清，最常使用的Gibco澳洲優(yōu)級胎牛血清濃度是10%。高濃度的血清可能改變細(xì)胞的基因表達(dá)譜，影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，我們在實(shí)驗(yàn)中使用10%的胎牛血清培養(yǎng)293T細(xì)胞，效果非常好。但是有些細(xì)胞也會使用5%的Hyclone FBS或者20%的Gibco澳洲優(yōu)級胎牛血清，要根據(jù)具體細(xì)胞選擇合適的胎牛血清濃度。
Gibco澳洲優(yōu)級胎牛血清保存方法：
1、需要長期保存的血清必須儲存于-20℃-70℃ 低溫冰箱中。4℃冰箱中保存時(shí)間切勿超過1個(gè)月。切勿將血清在37℃放置太久，否則血清會變得渾濁，同時(shí)血清中的有效成分會被破壞，而影響血清質(zhì)量。如果一次無法用完一瓶，可將40～45ml分裝于無菌50ml離心管中。由于血清結(jié)冰時(shí)體積會增加約10%，因此，血清在凍入低溫冰箱前，必須預(yù)留一定體積空間，否則易發(fā)生污染或玻璃瓶凍裂。
2、一般廠商提供的血清為無菌，無需再過濾除菌。如發(fā)現(xiàn)牛血清有懸浮物，則可將牛血清加入培養(yǎng)液內(nèi)一起過濾，切勿直接過濾牛血清。
3、瓶裝Gibco澳洲優(yōu)級胎牛血清解凍需采用逐步解凍法：-20℃至-70℃ 低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天。然后移入室溫，待全部溶解后再分裝，一般以50ml無菌離心管可分裝40～45ml。在溶解過程中須規(guī)則搖晃均勻，使溫度與成分均一，減少沈淀的發(fā)生。切勿直接將血清從-20℃進(jìn)入37℃解凍，這樣因溫度改變太大，容易造成蛋白質(zhì)凝集而出現(xiàn)沉淀。
4、熱滅活是指56℃，30分鐘加熱已*解凍的血清。加熱過程中須規(guī)則搖晃均勻。此熱處理的目的是使血清中的補(bǔ)體成分滅活。除非必須，一般不建議作此熱處理，因?yàn)闊崽幚頃斐裳宄恋砦镲@著增多，而且還會影響血清的質(zhì)量。補(bǔ)體參與反應(yīng)有：細(xì)胞毒作用，平滑肌細(xì)胞收縮，肥大細(xì)胞和血小板釋放組胺，增強(qiáng)吞噬作用，促進(jìn)淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞發(fā)生化學(xué)趨化和活化。
5、血清中的沉淀物絮狀物：主要是牛血清中的脂蛋白變性及解凍后牛血清中纖維蛋白造成，這些絮狀物不會影響血清本身的質(zhì)量。可用離心3000rpm，5分鐘去除，也可不用處理。顯微鏡下"小黑點(diǎn)"：經(jīng)過熱處理過的血清，沉淀物的形成會顯著增多。有些沉淀物在顯微鏡下觀察象"小黑點(diǎn)"，常誤認(rèn)為血清受污染。一般情況下，此小黑點(diǎn)不會影響細(xì)胞生長，但如果懷疑血清質(zhì)量，則應(yīng)立即停止使用，更換另一批號的血清。
